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上皮细胞

归档日期:06-24       文本归类:被覆线路      文章编辑:爱尚语录

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  上皮细胞是位于皮肤或腔道表层的细胞。上皮细胞根据器官的不同而有所不同:尿常规的上皮细胞,是衰亡、脱落的皮细胞,没有很特定的指向意义。非SLE的人,包括正常人,有了什么相关的炎症,脱落下去,给尿常规检到了,也是有的。

  上皮组织分为被覆上皮、腺上皮和感觉上皮三类,而通常所说的上皮就是指被覆上皮。

  柱状上皮细胞:主要分布于鼻腔、鼻咽、器官、肺、胃、肠、子宫颈、子宫内膜输卵管等部位。

  鳞状上皮细胞:被覆于全身皮肤、口腔、喉部、鼻咽的一部分、食道、阴道的全部以及子宫颈。鳞状上皮细胞分为基底层细胞、中层细胞和表层细胞。

  消化器官和肺等器官表面的上皮细胞,对于消化吸收、交换氧等发挥着重要作用

  1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1平方厘米小块。

  4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与线.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分钟。

  7.培养液:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2温箱培养。

  1.在含有少量培养液或Hanks液的容器中,用锋利刀片将组织反复切割成碎块。

  2.把组织碎块连同液体注入离心管中,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,置试管架3~5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2~3次。

  3.末次处理结束后,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3~4层无菌纱布滤入另管中。

  2.清洗:用含庆大霉素(400微克/毫升)和二性霉素(2微克/毫升的Hanks)液漂洗后,用钝器剥离下粘膜,剪成1mm3大小。

  5.接种:末次离心后加入含有1%~2%胎牛血清的完全培养基,接种入不同孔数的培养板中,接种量依不同实验目的而定。

  初代组织块培养:取新鲜肝脏,先剥除被膜和血管等纤维成分,用刀或剪刀把肝脏剪成1mm

  1.取产后的新鲜脐带。如不立即培养可以保存于4℃中,但不宜超过12小时。无菌剪取长10~15厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管,亦可用于培养。

  2.先用三通注射器吸温PBS液注入脐带的静脉中,洗除残血,注入口处宜用线绳结扎,以防液体返流。

  3.用血管钳夹紧脐带一端,从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1%的胶原酶,待末端出现液体后结扎之,令充满血管,注入口亦应结扎,以防液体返流,消化3~10分钟。

  4.吸出含有内皮细胞的消化液,注入离心管中,为获取更多细胞,可再注入温PBS冲洗2~3次彻底清除干净残余细胞,一并注入离心管中离心。

  5.吸除上清,加1640培养液,制成细胞悬液,接种入瓶皿中培养,顺利时2~3天内细胞即可长成单层。

  2.胰蛋白酶消化,Dulbecco改良Eagle氏培养液15ml(含10%小牛血清),接种到T-75 Falcon产培养瓶中培养。

  3.在细胞生长接近完全汇合时,收集培养液制成条件培养基;再用含10%小牛血清的新培养液后,也每隔两天收集一次,可获得多量条件培养。

  4.4000转/分离心后,再通过0.22μm微孔滤膜滤过,-20℃冻存备用(临用前融解)。

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