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胶体金试纸条的测试原理是什么?

归档日期:10-28       文本归类:被覆线      文章编辑:爱尚语录

  胶体金试剂条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成的,该技术是90年代初在免疫渗透技术的基础上建立的一种快捷简单的免疫学检测技术。 胶体金是氯金酸HAuCl4 的水溶胶,氯金酸在还原剂的作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。质量好的胶体金溶液是红色的,胶体金颗粒为球形,大小均一,无棱角。质量差的溶液是紫色,大小不一,形状各异。 原理 胶体金在碱性条件下带负电荷,与蛋白质分子的正电荷基团产生静电吸引,从而牢固结合。以硝酸纤维素膜为载体,利用了微孔膜的毛细血管作用,滴加在膜条异端的液体慢慢向另一端渗移,通过抗原抗体结合,并利用胶体金呈现颜色(红色)反应,检测抗原/ 抗体

  胶体金快速检测卡是采用胶体金免疫层析技术研制而成的,此技术是90年代初在免疫渗透技术的基础上建立的一种快捷简单的免疫学检测技术,市场上一般用到的有双抗体夹心法、双抗原夹心法、小分子竞争法等等。 胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,金离子还原后聚合成的一定大...小的金颗粒,它由一个基础的晶核(11个金原子形成的二十面体)和包围在外的双离子层构成(内层为负离子层AuCl2-,外层是带正电荷的H+)。由于静电作用,金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,故称胶体金。 。质量差的溶液烧制后,液面有漂浮物,大小不一,形状各异。胶体金颗粒大小,决定了我们用肉眼观察到的胶体金溶液颜色,由红到紫色。 胶体金一般在弱碱环境下带负电荷,会与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,一般称这种结合叫静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。除了与蛋白质结合以外,它还可以与许多其它生物大分子结合,如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,从而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 胶体金标记技术,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。用于胶体金标记的蛋白必须要经过前处理,其目的在于 1、去除高浓度的盐分,高浓度的盐分往往干扰蛋白与胶体金的吸附结合,或导致胶体金粒子的凝聚,这一步往往采用低浓度缓冲液来进行。 2、使蛋白分子尽量分散为单体,冻干蛋白或高浓度蛋白溶液中蛋白分子往往凝聚为多聚体大分子,可同时与多个胶体金粒子结合,影响标记的灵敏度和定量分析。 3、使蛋白具有适当的分子量。蛋白分子量过小(30 kD),形成的蛋白复合体往往是不稳定,可短时间内失活。而分子量过大时,被认为影响探针的灵敏度,特别是已知蛋白的结构与活性中心的情况下,去除对活性影响的结构部分是提高标记灵敏度,延长探针寿命(防止凝集)的有效办法。把分子量过小的蛋白与其它蛋白(如牛血清蛋白等)结合后,能制备出稳定性更强的探针。 当蛋白前处理完成后,接着要确定胶体金与蛋白结合的最佳pH值。对于理化性质不确定的蛋白这一步尤为重要。过量的蛋白与不同pH值的胶体金结合后,只有某一特定pH值能够形成结合最稳定的探针。在高浓度电解质(如NaCl)作用下不会凝聚。不同蛋白的适宜pH范围的宽窄大不相同。一般选择最小适宜pH值为最佳pH值。但有些探针的实际情况并不完全如此,最稳定的探针并不完全代表活性最好,这要靠实验验证。 在确定最佳pH值后,最后要确定最小蛋白量,即能够形成稳定探针的蛋白的最小量。如果在制备探针时加入太多的蛋白,不仅造成浪费,而且更为严重的是容易造成探针凝聚,并严重影响标记活性。因为探针溶液中的游离蛋白容易抢先与标记位点结合,起到“封闭”(Blocking)作用,而胶体金探针标记不上。在标记位点希少、被标记物含量较少的情况下要特别注意。 胶体金具有很高的动力学稳定性,在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢,可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。金溶胶必须有少量电解质作稳定剂,但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚,但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性,如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的稳定效果。. 当金溶胶吸附蛋白质后,溶胶的稳定性随溶液pH而变化,而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点,如ConA,过氧化物酶等,当pH较低时保持稳定,提高pH则显得不稳定,接近等电点或略高时又变得稳定了。标记后的胶体金溶液可用0.2~0.5mg/ml PEG20000 作为稳定剂。在4~10℃贮存数月有效,不宜冰冻。贮存中可能会发生程度不同的凝聚,可离心除去。 当今国内有很多胶体金试纸条生产厂商,江浙这一带尤为突出,推荐厂家:苏州快捷康生物技术有限公司。

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